产品货号：
KD1711
中文名称：
Tricine-SDS-PAGE制胶及电泳试剂盒
英文名称：
Tricine-SDS-PAGE Gel Preparation & Electrophoresis Kit
产品规格：
20T|50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
保存：2～8℃
产品内容：
注意：过硫酸铵(APS)为结晶性粉末，2～8℃储存，使用前每支加入1mL蒸馏水即为10% APS溶液，现配现用最佳，溶液用后-20℃可储存2个月。APS如出现严重结块，即已变质。
产品说明：
Tricine-SDS-聚丙烯酰胺制胶及电泳试剂盒(Tricine-SDS-PAGE)是目前电泳法变性分离多肽的主要方法，适用于低分子量蛋白(2.5～40kD)蛋白的分离。此试剂盒可以制备20或50块0.75mm×14cm×14cm胶。对于大于5kD的蛋白，无需制备隔离胶，双层胶足以分离。对于小于5kDa的蛋白，需要制备3层胶才能较好的分离。推荐使用4%浓缩胶，10%隔离胶，16%分离胶作为标准浓度，可以分辨出1～5kD的片段。Tricine-SDS-PAGE系统不同于常规的SDS-PAGE，使用两种缓冲液电泳，电泳槽内槽是1×阴极缓冲液，含有Tricine和SDS。外槽是1×阳极缓冲液，为0.2M Tris。
操作步骤：(以足够灌两块0.75mm×14cm×14cm胶为例)
一、制胶
1.标记3个50mL三角瓶，按下表用量配制分离胶30mL、隔离胶9mL和浓缩胶9mL。混匀后真空脱气10～15分钟。
2.在分离胶瓶中加入10% APS 150μL溶液和TEMED 30μL，轻旋混匀。
3.灌分离胶。用巴斯德吸管，将分离胶溶液沿着隔条边缘缓缓注入，直至距玻璃上沿约5cm。由于分离胶比重比隔离胶大，故可在其凝固前直接灌隔离胶。
4.在隔离胶瓶中加入10%的APS溶液75μL和TEMED 15μL，轻轻旋转混匀。
5.灌隔离胶。用巴斯德吸管，将隔离胶溶液沿着隔条边缘缓缓注入，直至距玻璃板上沿约3cm。
6.加入1cm高的水饱和异丁醇封胶。室温放置30～45分钟。(氧气会抑制胶凝固；水饱和异丁醇可用水代替，但效果会差一些)。
7.在浓缩胶瓶中加入10% APS溶液75μL和TEMED 15μL，轻轻旋转混匀。
8.灌浓缩胶。用巴斯德吸管，将浓缩胶沿着隔条边缘缓缓注入，直至距玻璃板上沿约1cm。
9.插入0.75mm厚梳子，补加浓缩胶溶液填满梳子间的空隙，通过抽真空或者吸水滤纸去除气泡。静置30～45分钟确认凝胶后小心拔出梳子。
二、加入电泳缓冲液
1.在上层缓冲液槽中加入1×阴极缓冲液，并用1×阴极缓冲液冲洗加样孔。
注：10×Tricine-SDS-PAGE阴极缓冲液用去离子水1:9稀释成1×阴极缓冲液。
2.在下层缓冲液槽中加入1×阳极缓冲液。
注：10×Tricine-SDS-PAGE阳极缓冲液用去离子水1:9稀释成1×阳极缓冲液。
三、上样
1.处理样品。如样品是蛋白沉淀物，则加入50～100μL新配的1×上样缓冲液溶解。如果样品是蛋白稀溶液，则需先浓缩蛋白，再与2×Tricine多肽上样液按1:1混合。
2.100℃煮沸3～5分钟灭活蛋白酶；膜蛋白则需37℃孵育15～60min。
注意：与上样缓冲液混合后的样品如未经灭活蛋白酶，切勿室温放置。
3.上样。如需考染，复杂蛋白样品建议上样量20μL(含25～50μg总蛋白)；含一种或几种蛋白的样品，建议上样量1～10μL。如需银染，上样量可相应减少10～100倍。
四、电泳
1.电泳。首先30 V恒压电泳1h，然后150 V恒压电泳4-5h。
注：上样液以考马斯亮蓝G-250为指示剂，其迁移速度要快于最小的肽。
2.终止电泳，取出凝胶进行后续的实验(建议银染染色，节约样品)。
注意：考染或银染时，尽可能采用快速染色方法，否则多肽有可能会扩散出PAGE胶而降低检测的灵敏度。
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